Fibroza chistica (mucoviscidoza) - Gena CFTR testare MLPA

Testul completează secvențierea NGS a genei CFTR, având rol esențial în identificarea variantelor structurale mari care nu pot fi detectate prin metodele standard de secvențiere.

Termen de execuție*

45 zile lucrătoare

Despre analiza CFTR – MLPA (deleții/duplicații)

Gena CFTR (7q31.2) este responsabilă de codificarea canalului de clor implicat în transportul ionic la nivelul epiteliilor respirator, pancreatic, intestinal și sudoral.

Pe lângă mutațiile punctiforme, o proporție semnificativă de cazuri de fibroză chistică sau fenotip CFTR-related este determinată de:

• deleții ale unuia sau mai multor exoni
• duplicații ale unor regiuni ale genei CFTR
• rearanjamente genomice complexe

Metoda MLPA permite evaluarea cantitativă a fiecărui exon al genei CFTR, identificând variații ale numărului de copii (CNV – Copy Number Variations).

Această tehnică este complementară secvențierii NGS și crește semnificativ rata de detecție a variantelor patogene.

Afecțiuni sau simptome asociate

Testul este indicat în:

• fibroză chistică (mucoviscidoză)
• forme atipice de CFTR-related disorder
• bronșiectazii difuze de cauză genetică
• insuficiență pancreatică exocrină
• infecții respiratorii recurente
• pancreatită cronică idiopatică
• infertilitate masculină obstructivă (CBAVD)
• screening genetic familial CFTR
• cazuri cu suspiciune clinică dar NGS negativ sau incomplet

Cui se adresează

• pacienților cu suspiciune de fibroză chistică
• pacienților cu fenotip CFTR-related și testare NGS negativă
• copiilor cu infecții respiratorii recurente și malnutriție
• adulților cu bronșiectazii idiopatice
• bărbaților cu azoospermie obstructivă
• cuplurilor aflate în evaluare genetică preconcepțională
• rudelor pacienților diagnosticați cu mutații ale genei CFTR
• cazurilor cu suspiciune genetică neconfirmată prin secvențiere

Metodologie de testare

• extracție ADN genomic din sânge periferic EDTA
• amplificare multiplex a regiunilor țintă ale genei CFTR
• ligare specifică a sondelor MLPA
• amplificare și cuantificare fragmentară
• analiză comparativă a intensității semnalului pentru fiecare exon
• detectarea:
  • delețiilor heterozigote sau homozigote
  • duplicațiilor exonice sau multi-exonice
• interpretare conform ghidurilor genetice internaționale

Beneficii și importanță clinică

• detectează deleții/duplicații CFTR nedetectabile prin NGS
• crește acuratețea diagnosticului de fibroză chistică
• completează analiza mutațiilor punctiforme ale genei CFTR
• permite identificarea cazurilor cu fenotip atipic CFTR-related
• sprijină consilierea genetică familială și reproductivă
• contribuie la un diagnostic complet în cazuri complexe
• optimizează strategia de testare genetică secvențială

Particularități și limitări

• nu detectează mutații punctiforme sau mici inserții/deleții
• trebuie utilizat complementar cu secvențierea NGS a CFTR
• pot exista variații tehnice legate de calitatea ADN-ului
• unele rearanjamente foarte complexe pot necesita metode suplimentare
• interpretarea necesită corelare cu fenotipul clinic și testul sudorii
• rezultatele trebuie integrate într-un algoritm diagnostic complet CFTR

Tip probă și condiții de recoltare

Probă necesară:

• sânge integral EDTA

Volum recomandat:

• 2 × 6 ml sânge periferic

Condiții de recoltare:

• recoltare venoasă standard
• nu necesită condiții speciale de pregătire
• transport conform protocolului laboratorului
• ADN stabil pentru analiză MLPA în condiții standard de transport

Analize asociate recomandate

• Secvențiere NGS a genei CFTR – identificarea mutațiilor punctiforme
• Testul sudorii (clor în transpirație) – confirmare funcțională
• Panel NGS boli respiratorii genetice
• Elastază pancreatică fecală
• Testare genetică familială CFTR
• Carrier screening preconcepțional pentru cupluri

Particularitate clinică importantă

În fibroza chistică, o proporție relevantă de pacienți prezintă deleții sau duplicații exonice ale genei CFTR, care nu sunt detectabile prin secvențiere standard NGS. Din acest motiv, MLPA este esențial ca test complementar, fiind recomandat în special în cazurile cu suspiciune clinică puternică și rezultat NGS negativ sau incomplet, pentru a asigura un diagnostic genetic complet și corect.