Gena DMD - Distrofie musculara Duchenne/Becker (testare MLPA)

Testul permite evaluarea variațiilor de număr de copii (CNV) la nivelul exonilor genei DMD, fiind esențial în diagnosticul molecular al celor mai frecvente forme de distrofie musculară X-linkată.

Termen de execuție*

45 zile lucrătoare

Despre analiza genei DMD – testare MLPA

Gena DMD, localizată pe cromozomul Xp21.2, este una dintre cele mai mari gene umane și codifică proteina distrofină, esențială pentru stabilitatea membranei celulelor musculare.

Defectele genei determină:

• Distrofia musculară Duchenne (DMD) – formă severă, cu debut precoce și evoluție rapidă
• Distrofia musculară Becker (BMD) – formă mai ușoară, cu debut mai tardiv și progresie lentă

Metoda MLPA este standardul de aur pentru detectarea:

• delețiilor exonice (un exon sau mai mulți exoni)
• duplicațiilor exonice sau multi-exonice
• rearanjamentelor mari ale genei DMD

Aceste tipuri de modificări reprezintă aproximativ 60–70% din cazurile de DMD/BMD.

Afecțiuni sau simptome asociate

Testul este indicat în:

• distrofie musculară Duchenne
• distrofie musculară Becker
• creșterea persistentă a creatinkinazei (CK)
• slăbiciune musculară progresivă la copil
• întârziere în achiziția mersului
• căderi frecvente și dificultăți motorii
• mers „waddling” (legănat)
• hipertrofie pseudomusculară a gambelor
• cardiomiopatie dilatativă de cauză genetică
• suspiciune de purtătoare la femei
• istoric familial de distrofie musculară X-linkată

Cui se adresează

• băieților cu suspiciune de distrofie musculară Duchenne/Becker
• copiilor cu întârziere motorie și CK crescută
• pacienților cu miopatie progresivă de cauză necunoscută
• femeilor suspectate că sunt purtătoare de mutații DMD
• familiilor cu istoric de distrofie musculară X-linkată
• cazurilor cu NGS negativ sau incomplet pentru DMD
• pacienților evaluați în neurologie pediatrică
• cazurilor cu cardiomiopatie dilatativă idiopatică

Metodologie de testare

• extracție ADN genomic din sânge periferic EDTA
• amplificare multiplex a exonilor genei DMD
• ligare specifică a sondelor MLPA
• cuantificare fragmentară a produselor amplificate
• analiză comparativă pentru determinarea variațiilor de număr de copii
• identificarea:
  • delețiilor exonice
  • duplicațiilor exonice
  • rearanjamentelor mari ale genei DMD
• interpretare conform ghidurilor internaționale de genetică medicală

Beneficii și importanță clinică

• detectează cea mai frecventă categorie de mutații din DMD (deleții/duplicații)
• confirmă diagnosticul molecular al distrofiilor musculare Duchenne și Becker
• permite identificarea purtătoarelor la femei
• oferă informații esențiale pentru consiliere genetică familială
• contribuie la stabilirea prognosticului
• permite corelarea cu eligibilitatea pentru terapii exon-skipping
• completează analiza prin secvențiere NGS a genei DMD

Particularități și limitări

• nu detectează mutații punctiforme (SNV) sau mici INDEL
• trebuie completată frecvent cu secvențiere NGS a genei DMD
• unele rearanjamente complexe pot necesita metode suplimentare
• interpretarea necesită corelare cu fenotipul clinic și nivelul CK
• nu înlocuiește evaluarea clinică neurologică și cardiologică
• poate necesita testare familială suplimentară pentru confirmare

Tip probă și condiții de recoltare

Probă necesară:

• sânge integral EDTA

Volum recomandat:

• 2 × 6 ml sânge periferic

Condiții de recoltare:

• recoltare venoasă standard
• nu necesită pregătire specială
• transport conform protocolului laboratorului
• ADN stabil pentru analiză MLPA

Analize asociate recomandate

• Secvențiere NGS a genei DMD – mutații punctiforme
• Creatinkinază (CK) – marker muscular
• Panel NGS boli neuromusculare
• EMG (electromiografie)
• RMN muscular
• Evaluare cardiologică (ECG, ecocardiografie)
• Testare genetică familială pentru purtători

Particularitate clinică importantă

Testarea MLPA a genei DMD este esențială în diagnosticul distrofiilor musculare Duchenne și Becker, deoarece majoritatea cazurilor sunt cauzate de deleții sau duplicații exonice. Identificarea exactă a rearanjamentului genetic este crucială pentru confirmarea diagnosticului, consilierea familială și, în unele cazuri, pentru eligibilitatea pentru terapii personalizate de tip exon skipping.